makalah identifikasi mikroba

KATA PENGANTAR

            Alhamdulillahirabbilalamin, banyak nikmat yang Allah berikan, tetapi sedikit sekali yang kita ingat. Segala puji hanya layak untuk Allah Tuhan seru sekalian alam atas segala berkat, rahmat, taufik, serta hidayah-Nya yang tiada terkira besarnya, sehingga penulis dapat menyelesaikan makalah akhir praktikum mikrobiologi dengan judul ” INOKULASI dan fisiologi.

Dalam penyusunannya, penulis memperoleh banyak bantuan dan motivasi dari berbagai pihak, karena itu penulis mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada laboran Ria febrianti S.pt beserta asisten praktikum mikrobiologi Siti rani ayuti S.pt atas bimbingan dan kepercayaan yang begitu besar kepada penulis. Semoga semua ini bisa menuntun pada langkah yang lebih baik lagi.

Meskipun penulis berharap isi dari makalah ini bebas dari kekurangan dan kesalahan, namun selalu ada yang kurang. Akhir kata penulis berharap agar makalah ini bermanfaat bagi semua pembaca. Amin ­

                                                                                                Pendahuluan          

 Latar belakang

Dalam teknik biakan murni tidak saja diperlukan bagaimanamemperoleh suatu biakan yang murni, tetapi juga bagaimana memeliharaserta mencegah pencemaran dari luar.Inokulasi dimaksudkan untuk menumbuhkan, meremajakan mikroba dan mendapatkan populasi mikrobayang murni

.Inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yanglama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi.Media untuk membiakkan bakteri haruslah steril sebelum digunakan.Pencemaran terutama berasal dari udara yang mengandung banyak mikroorganisme.

Pemindahan biakan mikroba yang dibiakkan harus sangat hati-hatidan mematuhi prosedur laboratorium agar tidak terjadi kontaminasi. Olehkarena itu, diperlukan teknik-teknik dalam pembiakan mikroorganisme yangdisebut dengan teknik inokulasi biakan. Identifikasi biakan mikroorganisme

Dalam teknik biakan murni tidak saja diperlukan bagaimana memperoleh suatu biakan yang murni, tetapi juga bagaimana memelihara serta mencegah pencemaran dari luar. Inokulasi dimaksudkan untuk menumbuhkan, meremajakan mikroba dan mendapatkan populasi mikroba yang murni .  Inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi . Agar biakan bakteri dapat dibuat , maka alat – alat harus disterilisasi sebelum inokulasi . Sterilisasi merupakan suatu proses untuk mematikan semua organisme yang terdapat pada suatu benda . Proses sterilisasi dapat dibedakan menjadi tiga macam yaitu , penggunaan panas ( pemijaran dan udara panas ) , penyaringan , penggunaan bahan kimia ( etilena oksida , asam perasetat , formal dehida dan glutaraldehida alkalin ) .

Dengan cara fisiologi

Mikroorganisme yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan sifat-sifat yang khas, begitu pula dengan bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Salah satu cara untuk mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk diidentifikasi ialah dengan metode pengecatan atau pewarnaan. Hal tersebut juga berfungsi untuk mengetahui sifat fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding sel bakteri melalui serangkaian pengecatan.

Karakterisasi merupakan salah satu kegiatan yang dilakukan untuk mengobservasi bakteri maupun kapang hasil isolasi (isolat). Kegiatan karakterisasi dapat dilakukan berdasarkan sifat sitologi (bentuk sel, gerak atau motilitas, sifat Gram dan endospora), sifat morfologi, dan sifat fisiologi. Uji sifat morfologi mencakup sifat-sifat koloni, seperti ukuran, bentuk, warna dan tepian, sedangkan uji sifat fisiologi diantaranya uji hidrolisis pati, hidrolisis lemak, hidrolisis protein dan uji katalase .

Uji fisiologis bakteri dilakukan untuk mengidentifikasi bakteri berdasarkan aktivitas selnya. Bakteri yang dapat menghidrolisis pati mempunyai aktivitas amilolitik, yaitu menghasilkan enzim amilase yang dapat mengubah pati menjadi molekul-molekul gula sederhana (monosakarida) untuk kebutuhan metabolisme sel. Aktivitas tersebut ditandai dengan adanya zona bening di sekeliling koloni pada uji hidrolisis pati.

Tujuan

        -Tujuan praktikum ini adalah untuk mengetahui karatkeristik sifat biokimia dan fisiologi bakteri. Mengetahui enzim-enzim yang dugunakan dalam uji bakteri, serta mengetahui cara mengidentifikasi mikroorganisme bakteri baik genus maupun spesiesnya.

       -

Tinjauan pustaka

inokulasi adalah pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusakan agar semua alat yang ada dalam hubungannya dengan medium agar tetap steril, hal ini agar menghindari terjadinya kontaminasi (Dwijoseputro, 1998).

                Menyiapkan ruangan Ruang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaaan .dalam labotarium pembuataan serum vaksin dan sebagainya. Inokulasi dapat dilakukan dalam sebuah kotak kaca (encast) udara yang lewat dalam kotak tersebut dilewatkan saringan melalui suatu jalan agar tekena sinar ultraviolet (Pelczar, 1986).

 Pemindahan dengan dengan pipet Cara ini dilakukan dalam penyelidikan air minum atau pada penyelidikan untuk diambil 1 ml contoh yang akan diencerkan oleh air sebanyak 99 ml murni (Pelczar, 1986).

 Pemindahan dengan kawat inokulasi Ujung kawat inokulasi sebaliknya dari platina atau nikel .ujungnya boleh lurus juga boleh berupa kolongan yang diametrnya 1-3mm. Dalam melakukuan penanaman bakteri kawat ini terlebih dahulu dipijarkan sedangkan sisanya tungkai cukup dilewatkan nyala api saja setelah dingin kembali kawat itu disentuhkan lagi dalam nyala (Pelczar, 1986).

Inokulasi merupakan pekerjaan memindahkan bakteri dari medium yang lama ke medium yang baru dengan tingkat ketelitian yang sangat tinggi. Untuk melakukan penanaman bakteri (inokulasi) terlebih dahulu diusahakan agar semua alat yang ada di dalam hubungannya dengan medium agar tetap sterli, hal ini agar menghindari terjadinya kontaminasi (dwijoeseputro, 1998). 

Dengan cara fisiologi

Aktivitas mikroba dipengaruhi oleh lingkungan. Perubahan yang terjadi dalam lingkungan dapat mengakibatkan perubahan sifat morfologi dan sifat fisiologi mikrobe. Beberapa golongan mikroba sangat tahan terhadap perubahan lingkungan, sehingga cepat dapat menyesuikan diri. Faktor lingkungan penting artinya dalam usaha mengendalikan kegiatan mikroba, baik untuk kepentingan proses ataupun pengendalian. Kegiatan mikroba, baik untuk kepentingan proses ataupun pengendalian. Lingkungan yang sangat berpengaruh terhadap kehidupan mikroba, dapat berbentuk lingkungan abiotik (fisik dan kimia), misalnya temperature, kelembapan, tekanan osmosis, pH senyawa toksik, arus listrik, radiasi, tegangan muka, dan tekanan hidrostatik dan mekanik. Sedangkan lingkungan biotik, yaitu asosiasi dan hama (Suriawiria 2005).

Pertumbuhan dan aktivitas mikroba dapat dikendalikan dengan berbagai cara, baik secara fisik, kimia, biologi. Salah satunya pengendalian aktivitas mikroba adalah dengan mengatur faktor-faktor lingkungan yang sangat mempengaruhi terhadap pertumbuhan dan aktivitas mikroba. Perubahan faktor-faktor lingkungan mengakibatkan perubahan beberapa sifat morfologi dan fisiologi bakteri. Namun demikian, ada beberapa jenis mikro yang mampu menyesuaikan diri dengan linngkungan luar. Bagi mikroba yang demikian biasanya mempunyai sifat toleran dan bersifat resiten terhadap lingkungan baru (Soetarto 1995).

Bakteri merupakan mikroba prokariotik uniselular yang berkembang biak secara aseksual dengan pembelahan sel. Bakteri tidak berklorofil kecuali beberapa yang bersifat fotosintetik. Bakteri mempunyai bentuk bulat, batang, dan lengkung, namun bentuk bakteri juga dapat dipengaruhi oleh umur.Bakteri diklasifikasikan berdasarkan deskripsi sifat morfologi dan fisiologi. Pembagian ini berdasarkan bentuk, sifat gram, kebutuhan oksigen, dan apabila tidak dapat dibedakan menurut ketiganya maka dimasukkan ke dalam kelompok khusus (Anonim, 2010).

Pembahasan

Inokulasi adalah menanam inokula secara aseptis ke dalam media steril baik pada media padat maupun media cair. Inokula merupakan bahan yang mengandung mikroba atayu biakan baik dalam keadaan cair maupun padat. Tujuan dari inokulasi yaitu biakan murni untuk keperluan diagnostic, karakterisasi mikroorganisme, industry farmasi atau kegiatan lain yang berkaitan dengan mikroorganisme. Nutrisi dan lingkungan yang menunjang pertumbuhan mikroorganisme serta suatu teknik kerja aseptis yangh dapat mencegah adanya kontaminan dalam biakan diperlukan untuk mendapatkan kultur yang murni. Identifikasi biakan mikroorganisme seringkali memerlukan pemindahan ke biakan segar tanpa terjadi pencemaran. Pemindahan mikroorganisme ini dilakukan dengan tekhnik aseptis untuk mempertahankan kemurnian biaka selama pemindahan berulangkali. Mikroorganisme dapat ditumbuhkan dalam biakan cair atau padat. Kekeruhan dalam suatu media cair menunjukan terjadinya pertumbuhan miroorganisme. Bila mikroorganisme menumpuk pada dasar tabung maka akan membentuk sendimen, sedangkan pada permukaannya pertumbuhan terlihat seperti partikel.

Teknik aseptis sangat diperlukan pada saat memindahkan biakan dari suatu tempat ke tempa lainnya. Penggunaanya teknik aseptis mencegah terjadinya kontaminasi dengan biakan yang mungkin bersifat patogen.

Teknik Inokulasi

 Ada beberapa metode yang digunakan untuk mengisolasi biakan murni mikroorganisme yaitu :

1.Metode gores

Teknik ini lebih menguntungkan jika ditinjau dari sudut ekonomi dan waktu, tetapimemerlukan ketrampilan-ketrampilan yang diperoleh dengan latihan. Penggoresan yangsempurna akan menghasilkan koloni yang terpisah. Inokulum digoreskan di permukaanmedia agar nutrien dalam cawaan petri dengan jarum pindah (lup inokulasi). Di antaragaris-garis goresan akan terdapat sel-sel yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuhmenjadi koloni.Cara penggarisan dilakukan pada medium pembiakan padat bentuk lempeng. Biladilakukan dengan baik teknik inilah yang paling praktis. Dalam pengerjaannya terkadangberbeda pada masing-masing laboratorium tapi tujuannya sama yaiitu untuk membuatgoresan sebanyak mungkin pada lempeng medium pembiakan

2.Metode tebar/ sebar 

Setetes inokolum diletakan dalam sebuah medium agar nutrien dalam cawan petri dan dengan menggunakan batang kaca yang bengkok dan steril. Inokulasi itu disebarkan dalam medium batang yang sama dapat digunakan dapat menginokulasikan pinggan kedua untuk dapat menjamin penyebaran bakteri yang merata dengan baik. Pada beberapa pinggan akan muncul koloni koloni yang terpisah-pisah. Metode tuang  Isolasi menggunakan media cair dengan cara pengenceran. Metode tuang ini dilakukan dengan cara nutrient agar terlebih dahulu di tuang lalu diberi mikroba 

3.Teknik Aseptik

 Sebelum benar-benar dilakukan proses kultur mikroorganisme, pertama kali kitaharus mempertimbangkan bagaimana agar tidak terjadi kontaminasi. Mikroorganisme adadimana-mana. Karena ukurannya yang sangat kecil, mereka mudah lepas dalam udara danpermukaan. Maka dari itu, kita harus mensterilisasikan medium kultur secepatnya setelahpreparasi untuk pemindahan mikroorganisme siap dikontaminasikan, ini biasanya terbunuh.Bagaimanapun, itu sama pentingnya untuk tindakan pencegahan sampai penangananberikutnya mediun kultur harus tetap steril. Demikian materi yang lain yang akan kontak  juga harus tetap terjaga kesterilannya.Teknik yang digunakan dalam pencegahan kontaminasi hingga kultur manipulasidan media kultur steril disebut teknik aseptik. Keunggulan itu dibutuhkan keberhasilandalam laboratorium mikrobiologi, dan salah satu cara belajar dengan pendampingmikrobilogi. Kontaminasi udara paling sering menjadi masalah karena udara selalu kontak dengan partikel debu dan umumnya banyak komunitas mikroorganisme didalamnya.Ketika wadah dibuka maka segera ditangani agar tidak terkontaminasi dengan udara sekitar.Transfer aseptik pada kultur dari salah satu medium ke medium yang lain harus lihaidengan loop inokulasi atau jarum harus disterilkan oleh pembakaran pada nyala api. Dalampertumbuhan kultur dibutuhkan tempat yang mudah dipindahkan ke permukaan agar datar,dimana pertumbuhan suatu koloni berasal dari pertumbuhan dan pembelahan sel tunggal

Dengan cara Fisiologi

Bakteri dapat digolongkan menjadi dua sifat yaitu sebagai bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Kedua gram tersebut dapat diidentifikasi berdasarkan karakterisasi sifat biokimia dan fisiologinya melalui beberapa pengujian yaitu uji Oxidatif/fermentatif, uji motilitas, uji oksidase, uji katalase dan uji gelatin.

1 Uji Oxidatif/Fermentatif

Langkah awal dalam uji O/F dilmulai dengan prosedur sterilisasi, tangan praktikan dan meja praktikum di semprot dengan alkohol 70%. Bunsen dinyalakan dengan menggunakan korek api. Jarum ose diambil dan dipanaskan pada api bunsen secukupnya. Setelah itu, koloni bakteri diambil. Jarum ose yang telah dipanaskan didiamkan sebentar dan ditempelkan pada koloni bakteri tersebut. Kemudian jarum tersebut di inokulasi secara vertikal pada satu set O/F medium. Salah satu tabung diberikan parafin cair sebanyak 1 ml, dan yang satunya tidak diberikan parafin. Langkah terakhir api pada bunsen dimatikan dan kedua tabung reaksi tersebut diinkubasi dalam inkubator selama 24 jam.

2 Uji Motilitas

Pada uji motilitas, langkah awal dilmulai dengan prosedur sterilisasi, tangan praktikan dan meja praktikum di semprot dengan alkohol 70%. Bunsen dinyalakan dengan korek api. Jarum ose diambil dan dipanaskan pada api bunsen secukupnya. Selanjutnya koloni bakteri diambil dengan jarum inokulasi. Jarum ose kemudian diinokulasi secara vertikal pada tabung reaksi. Setelah selesai, api dimatikan dan tabung diinkubasi dalam inkubator selama 24 jam.

3 Uji Katalase

Pada uji katalase dimulai dengan prosedur sterilisasi, tangan praktikan dan meja praktikum di semprot dengan alkohol 70%. Bunsen dinyalakan dengan menggunakan korek api. Jarum ose diambil dan dipanaskan pada api bunsen secukupnya. Jarum didiamkan sebentar dan kemudian ditempelkan pada koloni bakteri dalam agar miring. Setelah itu, bakteri koloni tersebut diletakkan pada gelas objek. Kemudian diberi larutan hydrogen peroksida pada koloni tersebut. Langkah Selanjutya dilakukan pengamatan terhadap gelas objek tersebut.

4 Uji Oksidase

Pada uji oksidase dimulai dengan prosedur sterilisasi, tangan praktikan dan meja praktikum di semprot dengan alkohol 70%. Bunsen dinyalakan dengan menggunakan korek api. Jarum ose diambil dan dipanaskan pada api bunsen secukupnya. Jarum ose tersebut selanjutnya ditempalkan pada biakan bakteri. Kemudian p-aminodimethylaniline-oxalat 1% diteteskan pada kertas saring. Jarum yang telah ditempeli biakan bakteri ditempelkan di atas tetesan cairan p-aminodimethylaniline-oxalat 1% pada kertas saring. Kemudian diamati perubahan warna yang terjadi.

5 Uji Gelatin

Pada gelatin dimulai dengan prosedur sterilisasi, tangan praktikan dan meja praktikum di semprot dengan alkohol 70%. Bunsen dinyalakan dengan menggunakan korek api. Jarum ose diambil dan dipanaskan pada api bunsen secukupnya. Jarum didiamkan sebentar dan kemdian dimasukkan dalam tabung biakan bakteri. Jarum selanjutnya diinokulasikan pada tabung yang telah berisi gelatin. Setelah itu, api dimatikan dan gelatin yang telah diisi dengan bakteri dimasukkan kedalam ice-bath selama 24 jam. Prosedur yang sama juga dilakukan untuk bakteri yang berbeda.

Penutup

Kesimpulan

Saran

                                                                                Daftar pustaka